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血球计数板的步骤是什么?需要注意哪些?

来源:http://www.ycfzbl.com/news/448.html   发布时间:2022-08-30

血球计数板的步骤是什么?需要注意哪些?
细胞计数法是计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。 一般用计数板(血细胞计数板)进行。 即,既可以用于计数分离(分散)细胞培养接种前制备的细胞悬液中的细胞数,也可以用于计数培养物的细胞数。 无论计数对象如何,都需要制备分散的细胞悬液。
一.步骤
1、制备细胞悬液:对悬液培养的细胞可以直接进行以下步骤2 (计数和计算过程)。 如果计数对象是贴壁生长的细胞,首先需要将培养物按以下步骤制备成细胞悬液。
1 )、停止培养,吸出培养液,用PBS洗涤培养物一次。
2 )、在培养瓶中加入0.25%胰蛋白酶溶液1mL,37消化3~5min。 在此期间我一直在镜子下观察。 当细胞变圆接近脱壁时丢弃消化液。
3 )、一定量的培养液:(这些培养细胞不再有用时,加入PBS),用吸管喷入,使细胞脱离贴壁制成细胞悬液。
2、计数和计算过程
1 )细胞计数板中央放置计数专用盖玻片
2 )用玻璃虹吸管抽吸细胞,使虹吸管流出盖玻片上或下计数板上的凹坑,等待盖玻片充满液体。
3 )显微镜下计数方形大方眼内细胞总数。 压线的细胞只计入上线和左线,对于细胞团,按每个细胞计数。

4 )细胞悬液密度计数如下。 细胞密度=(4个大格细胞总数/4)104个/ml。


二、注意事项:
1 )一定要分散在单个细胞中,清点样品前,充分搅拌细胞悬液。
2 )显微镜计数,遇到两个以上细胞组成的细胞团,应当用单个细胞计算。如果细胞团10%表示细胞分散不充分。

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