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防止组织切片前载玻片脱落!

浏览: 发表时间:2024-02-20 08:42:06

防止组织切片前载玻片脱落!

无论后续实验操作如何,都必须处理用于安装显微切片的载玻片以防止其掉落。防剥离处理的基本方法是在载玻片表面覆盖一层防剥离剂,可以涂抹或浸渍。常用的防脱落剂有蛋清甘油、明矾明胶、APES、聚赖氨酸等,其中APES为常用。

(1)蛋清甘油

在免疫组织化学技术发展之前,蛋清甘油是一种传统的抗脱发剂,由于其制备简单、成本低、毒性低,至今仍被广泛使用。在不进行加热或蛋白质相关反应的情况下具有较高的粘附效果,并且对染色的干扰很小,因此可以日常使用。制作方法:取适量新鲜蛋清,与等量甘油混合,搅拌均匀直至起泡。接下来,加入芝麻大小的百里酚颗粒(约0.01克/100毫升)并再次混合均匀。密封并冷藏以备后用。为防止载玻片剥落,可将玻璃棒沾取少量,放在载玻片表面,用手掌均匀涂抹防滑剂。在除哑光表面之外的载玻片的整个表面上涂抹薄薄的一层。干燥后可以切片、粘贴,但多可以保存一个月。

该方法具有处理载玻片体积小、处理速度快、可立即涂布使用的优点。油膏的难点在于对涂布操作有一定的要求,只有均匀涂布才能避免底色沾污。如果载玻片数量较多,或者切片可能用于加热或蛋白质反应,则应使用其他防脱落剂和浸泡。

(2) 明矾明胶

明矾明胶防剥剂的主要成分含有明胶,不适合某些蛋白质反应,而且该剂型在浸入碱性液体的环境中加热,导致防剥性能较差。因此,明矾明胶实际上是蛋清甘油的改良试剂,虽然具有成本低、制备容易、粘合效果优异等优点,但其应用并未得到广泛拓展。其中,钾明矾明胶混合物通过添加0.5g钾明矾(十二水合硫酸铝钾)、1g明胶、1ml甘油、0.01g百里香粉和蒸馏水而配制成100ml。对于日常使用,制备过程必须加热至60℃,密封并冷藏。还有铬明矾明胶等其他制剂。

在处理载玻片之前,将钾明胶明胶彻底预热至60℃。彻底清洁载玻片后,将其放在染色架上,浸泡5分钟,取出并风干,放入载玻片盒中防尘保存,并在1个月内使用。

(3) APES

APES的官方学名是3-氨基丙基三乙氧基硅烷,广泛用作载玻片的防滑剂。对玻璃表面进行化学修饰会改变玻璃表面的物理和化学性质,并使组织切片牢固地粘附在载玻片上。 APES用途广泛,从常规染色到特殊染色及各种组织化学测试,且不影响实验结果。此外,即使在需要长时间加热的情况下(例如高温抗原修复),APES  也能保持良好的粘附性。APES在室温下为液体,与丙酮以1:50(v/v)的比例混合,用作防脱落处理液。将载玻片彻底清洗干燥后,置于架子上,浸入丙酮中1分钟,转移至防干工作液中,浸泡30秒,提起晾干1分钟,然后转移至防干工作液中。丙酮并快速浸泡它们。马苏。并让它风干。载玻片存放在防尘盒中。如果使用干燥剂保持干燥,在室温下至少六个月内不会出现故障。为防止防脱落剂分布不均匀和产生气泡,在防脱落、切片、烘烤过程中请小心谨慎。此外,在水浴安装石蜡切片时,必须一步安装切片。否则,移动这些部分可能会很困难。

(4) 多聚赖氨酸

L-聚赖氨酸,即聚-L-赖氨酸,用于载玻片防剥离处理,通用性更强,热稳定性好,高温剥离率较低,这使得其成本比APES高。先配制0.1%(w/v)浓缩液,室温密封备用(有效期1年)。使用前以1:10(v/v)的比例与蒸馏水稀释混合,形成工作溶液(该溶液在冰箱中可保存3个月,但不应装入玻璃容器中)。将干净、干燥的载玻片浸入该溶液中1 分钟,并在室温下干燥过夜或在60℃下干燥1 小时。存放在防尘盒中,并在3个月内使用。请注意,每100毫升工作溶液多只能处理80-100张载玻片。如果此后继续处理,防滑性能会明显下降。


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