血球计数板的使用方法是什么？

1、根据待测菌液的浓度，加入灭菌水适当稀释溶液（斜率一般稀释100倍），计数每小方格内的细菌数作为频率。

2、准备一个干净的血细胞计数器，并用盖玻片盖住计数区域。

3、充分摇匀菌悬液，用滴管吸取少量，沿盖玻片下缘从计数板中央平台两侧的凹槽滴入少量（不要太多）。由于利用液面注入菌液，计数区域充满张力，防止气泡形成，从凹槽流出的多余菌液被吸水纸吸收。也可将菌悬液直接滴在计数区上（为避免加盖玻片后增加计数区的深度，计数区两侧的平台不要沾染菌悬液）。添加盖玻片（尽量不要产生气泡）。

4、静置一段时间，直至细胞沉淀在计数板上，不再随液体漂浮。将血球计数板置于显微镜载物台上并夹紧，先用低倍显微镜找到计数区域，然后切换至高倍显微镜观察计数。活细胞的折射率与水接近，因此观察时需要降低光照强度。

5、计数时，如果计数区域由16个中方格组成，则计算左上、左下、右上、右下对角线的中心方格（即100个小方格）的细菌数量。对于中心25个方格组成的计数区域，除了统计中心的4个方格外，还需要统计中心方格（即80个小方格）的细菌数量。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，需要对计数过程中放置在网格线上的细胞进行统一的统计。如果细菌在一个大方格内呈双线，计数时应计数顶线而不是底线，计数左线而不是右线，以减少误差。即该格子的上、左两行细胞按规定计入本格，下、右行细胞按规定计入相应格。请参见右图。所以这个网格中的单元格数量是3。

6、对于酿酒酵母来说，一旦芽达到母细胞一半大小，就可以算作2个细胞。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应有显着差异，否则需重复操作），并根据公式计算每mL（g）菌悬液的细胞数。

7、测量完成后，取下盖玻片，用水冲洗血细胞计数器，但不要用硬物摩擦或擦拭，以免损坏网格刻度。清洗后请自行吹干或使用吹风机并存放在盒子中。