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如何使用血球计数板?-飞舟玻璃

浏览: 发表时间:2023-05-08 10:30:22

如何使用血球计数板?-飞舟玻璃

一、血细胞计数板的使用原理

显微直接计数法是将待测样品的少量悬液置于一定面积和体积的专用载玻片(又称细菌计数器)上,在显微镜下直接计数,然后计算出含有细菌。离开。血细胞计数器是常用的细菌计数器之一。

血细胞计数器是专门用于对大型单细胞微生物进行计数的仪器。它由比普通载玻片更厚的特殊载玻片制成。滑梯上有四个凹槽,形成三个平台。中间的平台较宽,中间被一条短横槽分成两半,每半上刻有一个格子。方格上刻有9个大方格,其中只有中间的大方格是帐房。这个大正方形的长宽各为1mm,深为0.1mm,体积为0.1mm3,即1mm1mm0.1mm正方形的计数板;大方块的长宽均为2mm,深度为0.1mm。 mm,其体积为0.4mm3,即一块2mm2mm0.1mm正方形的计数板。血细胞计数板上面刻有一些符号和数字,意思是:XB-K-25是计数板的型号和规格,表示计数板分为25个中间格子;盖上盖玻片后0.1mm为计数腔室的高度; 1/400mm2表示计数室面积为1mm2,分为400个小格子,每个小格子的面积为1/400 mm2。点票室通常有两种规格:一种是1625型,即大正方形分为16个中格,每个中格又分为25个小格;另一种是2516型,即大方格分为25个中格,每个中格又分为16个小格。但不管是哪种结构的点票室,都有一个共同的特点,那就是每个大方格都是由1625=2516=400个小方格组成的。

1、1625型计数板把计数室放大,可以看到它有16个中间格子,一般取四个角:1、4、13、16四个中间格子(100个小格子)进行计数。将中间每个格子放大,可以看到25个小格子。重复计数3次,取平均值。计数后,按以下公式计算:

酵母细胞数/1mL=100 个小方块中的总细胞数/100×400×10000  稀释倍数

2、25×16型的计数板 中央大方格以双线等分成25个中方格,每个中方格又分成16个小方格,供细胞计数用。一般计数四个角和中央的五个中方格(80个小方格)的细胞数。计数重复3次,取其平均值。计数完毕后,依下列公式计算:

酵母细胞个数/1mL =80个小方格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数

二、血细胞计数器的使用方法

使用血细胞计数器计数时,请按照以下实验步骤操作:

1、显微镜计数室。在添加样品之前,对计数板的计数室进行显微镜检查。如有污垢,需清洗干燥后方可计数;

2、添加样品。用专用盖玻片盖住洁净干燥的细胞计数板计数室,用移液管吸取稀释后的酵母悬液,滴在盖玻片边缘,让培养基自行缓慢浸润,充满计数室一次,为防止气泡的产生,细胞悬液的填充量不应超过计数室台面与盖玻片之间的矩形边缘。多余的培养液可用滤纸吸去;

3、数数。稍等片刻(约5分钟),待所有酵母细胞沉降到计数室底部后,将计数板置于载物台中央,先在低倍镜下找到计数室的位置,然后切换到高倍镜进行观察、计数和记录。

三、血细胞计数板使用注意事项

 《培养液中酵母菌种群数量的动态变化》 实验是一个长期的实验(7天左右),必须提前做好周密的计划,有程序,有时间,有人员。取样法采用每天用血细胞计数器对酵母菌进行计数,计数时应注意以下几个方面。

1、每天同一时间,各组取出本组试管,用血细胞计数器计数酵母菌数,并做记录,连续观察7天。

2、从试管中吸出培养基进行计数前,轻轻摇动试管数次,使酵母分布均匀,防止酵母结块沉降,提高计数的代表性和准确性。误差很小。

3、如果一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应将培养液稀释,以利于酵母菌的计数。具体方法是:充分摇匀试管,取酵母培养液1mL,加两倍无菌水稀释,稀释n次,然后用血细胞计数器计数,所得值乘以稀释倍数。每个小方格内含有4-5个酵母细胞为宜。特别是在培养后期,需要对样本进行稀释和计数。

4、活酵母有出芽现象。如果芽达到母细胞的一半大,就可以算作两个细菌。如果芽小于母细胞的一半,它就是一个酵母细胞。

5、对于压在网格边界上的酵母菌,应统计同一边相邻两侧的细菌数。一般应采取“数上线不计下线,数左线不计右线”的原则,其余两侧不计。计数时,如果使用规格为16格25格的计数室,则应取左上、右上、左下、右下四个中间格(即100个小格)的酵母数) 根据对角线位置;如果规格为25格16格的计数板,除了取其对角线的4个位置外,还需要统计位于中央的一个中间格(即80个小方格)内的酵母菌数量。

6、计数一个样品应按两个计数室计算的平均值计算,每个样品可计数三次,然后取平均值。计数时应不时调整焦距,以便观察不同深度的细菌。按公式计算每1ml(或10mL)菌液中所含酵母菌数。

7、血球清洗

使用后,用自来水清洗血细胞计数器,不要用硬物清洗,清洗后自行或用吹风机吹干,或用95%乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水,擦干它。通过显微镜观察每个细胞中是否残留细菌或其他沉积物。如果不干净,必须反复清洗,直到干净为止。


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