飞舟玻璃--血球计数板的使用方法是什么?
根据待测菌悬液的浓度,加入无菌水适当稀释(一般在斜面上稀释100倍),以每个细胞的细菌数作为度数。
取一个干净的血细胞计数器,用盖玻片覆盖计数区。
将菌悬液摇匀,用滴管取少许,沿盖玻片下缘从计数板中间平台两侧的凹槽中滴一小滴(不要太多),让菌悬液利用液体的表面。张力充满计数区,以免产生气泡,并用吸水纸吸去槽内流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴在计数区上(不要让计数区两边的平台沾上菌悬液,以免加盖玻片后增加计数区的深度) ,然后盖上玻璃(不要产生气泡)。
静置片刻,让细胞沉淀在计数板上,不再随液漂移。将血细胞计数器放在显微镜的舞台上并牢牢夹住。先找到低倍镜下的计数区,然后切换到高倍镜下观察计数。由于活细胞的折射率与水相似,因此观察时应减弱光强。
计数时,若计数区由16个中间方格组成,则按对角线分别统计左上、左下、右上、右下4个中间方格(即100个小方格)内的细菌数方向。如果是由25个中方格组成的计数区,除了统计上述4个中方格外,还需要统计中央中方格(即80个小方格)的细菌数。为保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,计数时落入网格线上的细胞统计应有统一规定。如果细菌位于大格子的双线,计数时要数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。即位于该格子的上行和左行的单元格按规定计入该格子,位于该格子下行和右行的格子计入相应的格子。见右图:即这个格子中有3个被计数的单元格。
对于出芽酵母,当芽长到母细胞的一半大时,可以算作两个细菌。每个样品重复计数2-3次(每次数值不能相差太大,否则需重复操作),按公式计算每mL(g)菌悬液中所含细胞数。
测量完成后,取下盖玻片,用水冲洗血细胞计数器。请勿用硬物清洗或擦拭,以免损坏网格刻度。洗完后,自己吹干或用吹风机吹干,放入盒子里存放。